重组表达GP120分子对RA外周血CD4<'+>T细胞抑制的研究
类风湿关节炎(rheumatoidarthritis，RA)是一种原因不明的，以慢性进行性多关节损害为特征的自身免疫性疾病。在疾病的发展中T细胞起着重要的作用。细胞因子分析有证据表明：即CD4+T细胞在疾病的开始可能是关键性的，已确定的滑膜炎可能依赖T细胞的辅助。通过单克隆抗体或封闭与B细胞的相互作用而清除CD4+T细胞能够阻断自身免疫病。 Gp120是人免疫缺陷病毒(humanimmunodeficiencs,HIV)的衣壳蛋白，由基因env编码，其分子量为120KD，负责结合CD4受体和共受体，决定细胞嗜性。在病毒侵入人体T细胞的过程中发挥重要的作用，同时它还存在游离态的形式，通过一种类似于超抗原作用的途径，在体内非特异性地激活一些主要的免疫细胞，从而大大增强了HIV对人体的危害作用。 目的:旨在研究重组表达的gp120分子对RA患者外周血CD4+T细胞活性的影响，为RA的生物治疗寻找新的途径。 方法:在原有的gp120基因原核表达载体的基础上，构建重组gp120真核表达质粒，再以阳离子聚合物来包裹真核质粒pcDNA3-gp120，转染NIH3T3小鼠成纤维细胞系，经G418筛选阳性克隆后，免疫组化鉴定gp120表达，将表达gp120的NIH3T3细胞系与RA病人外周血淋巴细胞共同培养，同时以转染空质粒载体无gp120表达的NIH3T3细胞系与RA病人外周血淋巴细胞共同培养作对照分组，最后采用ELISA法测定培养上清中的sIL-2R(可溶性白介素2受体)的表达情况，来分析gp120分子对RA外周血CD4+T细胞的抑制作用。 结果: 1、gp120真核表达载体成功构建，克隆片断基因序列与NCBIGeneBank报道一致。 2、NIH3T3/pcDNA3.0-gp120细胞表达gp120分子的检测：采用免疫组化染色方法，在光学显微镜下可见NIH3T3/pcDNA3.0-gp120细胞细胞质呈棕黄色，而未转染pcDNA3.0-gp120的NIH3T3细胞及转染pcDNA3.0空载体的NIH3T3细胞不显色。 3、重组表达的gp120分子对体外培养的RA患者外周血CD4+T细胞活性有抑制作用。 结论:本实验成功地构建了真核表达载体pcDNA3.0-gp120，并在NIH3T3细胞系中成功表达；表达gp120分子的NIH3T3在与RA患者外周血淋巴细胞共培养中，观察到上清中的sIL-2R的表达受到抑制，表明gp120分子对RA外周血CD4+T细胞有明确的抑制作用。
- 作者：
- 郝煜
- 学位授予单位：
- 大连医科大学
- 专业名称：
- 中西医结合内科
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2006年
- 导师姓名：
- 于清宏
- 中图分类号：
- R593.22
- 关键词：
- 转基因；类风湿关节炎；T细胞；滑膜炎；人免疫缺陷病毒
- gp120；transgene；rheumatoid arthritis；TCD4~+